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大鼠星型膠質(zhì)細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)——胰酶消化法

發(fā)布時(shí)間： 2021-12-05　　點(diǎn)擊次數(shù)： 1286次

材料與儀器
SD大鼠
苯巴（匕匕）妥解剖液胰蛋白酶 Dnase DM培養(yǎng)液
離心管培養(yǎng)箱手術(shù)器材
步驟
一、取14.5d SD大鼠一只。

二、苯巴（匕匕）妥0.5 ml 腹腔注射，待麻醉后置于手術(shù)臺(tái)上，酒精棉球消毒皮膚，開(kāi)腹取出子宮（約12-14個(gè)），放入解剖液中，剖開(kāi)子宮，取出胚胎，放入解剖液中，在耳眼之間離斷，取頭側(cè)部組織，去除腦膜組織，取原始中腦區(qū)組織，放入離心管裝的解剖液中，待全部取出后，1500轉(zhuǎn)2分鐘。

三、用吸管吸出上清液，在組織細(xì)胞沉淀中加入胰蛋白酶一管（1 ml/vial），室溫30分鐘，1500轉(zhuǎn)，離心5分鐘（離心前可加入解剖液以終止胰酶作用）。

四、吸去上清，在組織細(xì)胞沉淀中加入Dnase 一管（2 ml/vial），37℃反應(yīng)10分鐘，1500轉(zhuǎn)，離心5分鐘，吸去上清，在組織細(xì)胞沉淀中加入2 ml DM培養(yǎng)液吹打，計(jì)數(shù)（計(jì)數(shù)公式為（N1+N2+N3+N4）/4x104），以3x105個(gè)/瓶在培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)，做好標(biāo)記（時(shí)間、原代的還是第幾代傳代，姓名，細(xì)胞名稱等），放入培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

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