二、 形態(tài)學(xué)觀察

倒置相差顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)和生長狀況。

三、 細(xì)胞生長曲線繪制

傳代后的細(xì)胞以 2x104/ml 的密度種植于24 孔培養(yǎng)板中培養(yǎng)，3 天換液1 次， 每24 小時取3 孔計數(shù)，連續(xù)7 天，取均值繪制生長曲線。

四、星型膠質(zhì)細(xì)胞的鑒定

膠質(zhì)纖維酸性蛋白(GFAP)免疫細(xì)胞組織化學(xué)鑒定方法。取星型膠質(zhì)細(xì)胞去除培養(yǎng)基，用PBS洗3 遍，4%多聚甲醛室溫固定1 小時，PBS洗3 次，每次5 分鐘，0.3% H2O2 30 分鐘以去除內(nèi)源性過氧化物，PBS洗3 次每次5 分鐘，加含0.5% Triton X-100 的山羊血清封閉30 分鐘，滴加兔抗GFAP 抗體(1:75)，4℃ 18 小時，PBS洗3 次每次5 分鐘，滴加生物素標(biāo)記羊抗兔IgG，室溫20 分鐘，PBS洗3 次，每次5 分鐘，滴加辣根酶標(biāo)記鏈霉卵白素工作液，室溫20 分鐘，PBS洗3 次，每次5 分鐘，DAB顯色。

1. 形態(tài)學(xué)觀察：光鏡下，傳代的星型膠質(zhì)細(xì)胞折光性強，形狀不規(guī)則，主要為多角形，胞體大而扁平、胞質(zhì)豐富，細(xì)胞核圓形或卵圓形，偏于胞體一側(cè)，內(nèi)有1-2 個核仁，有多個粗短枝狀初級胞突，部分細(xì)胞突起變細(xì)變長，6-7 天后細(xì)胞融合成單層，符合神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞生長特性，如下圖。
 

星型膠質(zhì)細(xì)胞單層生長(x100)

圖1：星型膠質(zhì)細(xì)胞形成融合狀，單層生長(x200)