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    引物設(shè)計原則

    發(fā)布時間: 2023-05-05  點擊次數(shù): 1455次

    1)擴增產(chǎn)物長度 100 bp-150 bp 為佳;

    2)引物長度 17 bp-25 bp 最好;

    3)正向引物和反向引物的 Tm 值最好相差不要超過 1℃。Tm 值調(diào)整至 60℃-65℃為佳;

    4)引物的 GC 含量控制在 40%-60%之間,最佳為 45%-55%;

    5)引物 3'末端堿基最好為 G 或 C 或 A,避免使用 T;

    6)避開引物內(nèi)部或者兩條引物之間有 3 個堿基以上的互補序列,二條引物之間的 3'端避開有 2 個堿基以上的互補序列;

    7)引物 A、G、C、T 整體分布盡量要均勻,避免使用 GC 或者 TA 含量高的區(qū)域,尤其是 3'端,必須避開 GC 含量不均勻的區(qū)域;

    8)最好跨內(nèi)含子設(shè)計引物。


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