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    植物原生質(zhì)體的制備

    發(fā)布時(shí)間: 2023-01-29  點(diǎn)擊次數(shù): 1389次

    原理

    去掉植物細(xì)胞壁的方法可以是機(jī)械的人工操作,也可以利用酶解法。較早利用機(jī)械法制備原生質(zhì)體的首-推Klercker(1892),直到1960 年英國科學(xué)家Cocking 才第一次用酶法大量制備原生質(zhì)體。本實(shí)驗(yàn)以植物的葉肉組織為材料,利用纖維素酶和果膠酶來消化細(xì)胞壁,分離細(xì)胞。

    材料與儀器

    油菜或菠菜或煙草
    氯化鈣 蒸餾水 2蔗糖 酶解液
    顯微鏡 離心機(jī) 離心管 剪刀 鑷子 吸管 培養(yǎng)皿 載玻片 蓋玻片

    步驟

    1、取材 根據(jù)實(shí)驗(yàn)?zāi)康暮蜅l件選取不同的材料

     

    2、分離原生質(zhì)體

     

    (1) 撕葉下表皮

     

    (2)酶解 將撕去下表皮的葉片剪成小塊,放在盛有5mL 酶液的小培養(yǎng)皿中,讓去除下表皮的一面接觸酶液,輔滿一層,在25——28℃下酶解60——90 分鐘

     

    3、收集純化

     

    (1)用吸管將酶解液吸至5mL 離心管中,以600rpm 離心5 分鐘以上,使原生質(zhì)體沉降

     

    (2)將上清(酶解液)回收,剩下原生質(zhì)體及殘?jiān)诠艿?/p>

     

    (3)加氯化鈣液約2mL,輕輕吹打均勻

     

    (4)用注射器向離心管底部緩緩注入蔗糖約2—3mL,出現(xiàn)下部蔗糖液,上部原生質(zhì)體懸浮液

     

    (5)以600rpm 離心10 分鐘,在兩液相之間出現(xiàn)一條綠色帶,便是純凈的原生質(zhì)體

     

    4、觀察或培養(yǎng)

     

    取少許原生質(zhì)體于載片上,蓋片觀察其形態(tài),或者將原生質(zhì)體接種在培養(yǎng)基上進(jìn)行培養(yǎng),再生植株。

    注意事項(xiàng)

    要培養(yǎng)懸浮細(xì)胞系需較長時(shí)間。因此,應(yīng)著重改善培養(yǎng)條件,主要包括選用合適 的培養(yǎng)基 包括培養(yǎng)基 種類 、添加物 、激素種類及水平等 及培養(yǎng)方式 根 據(jù)培養(yǎng)物狀態(tài)適時(shí)改換適宜培養(yǎng)基 選擇合適的外植體及誘導(dǎo)時(shí)期 。

    常見問題

    原生質(zhì)體是裸露的、具有生命活性的細(xì)胞,體內(nèi)包裹著細(xì)胞核、細(xì)胞器、細(xì)胞質(zhì)等, 因此原生質(zhì)體具有再生細(xì)胞壁、進(jìn)行連續(xù)分裂并生成完整植株的能力 , 即具有細(xì)胞全*性。原生質(zhì) 體能 攝 人 如 DNA、質(zhì)粒 、病毒 、細(xì)菌 、細(xì)胞器等外源物質(zhì) , 是植物細(xì)胞工程進(jìn)行遺傳操作 、基因轉(zhuǎn)移的良好材料 。

     

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