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    難轉(zhuǎn)染細胞Thp-1高效率轉(zhuǎn)染條件分享

    發(fā)布時間: 2021-11-10  點擊次數(shù): 1896次

    Thp-1細胞高效率轉(zhuǎn)染條件分享


    一、轉(zhuǎn)染材料準備

    1. 轉(zhuǎn)染試劑用量:10ul

    2. siRNA濃度:20um/L

    3. 細胞密度:1*106-1*105

    4. 轉(zhuǎn)染用培養(yǎng)板:6孔板

    5. 轉(zhuǎn)染試劑:Advanced DNA RNA轉(zhuǎn)染試劑;貨號:AD600150

    6. 轉(zhuǎn)染時間:48小時

    7. 細胞培養(yǎng)胎牛血清:Z7180FBS-500超低內(nèi)毒素胎牛血清

    8. 細胞凍存液:L0100無血清細胞凍存液.

    注意:本細胞轉(zhuǎn)染用量條件不適合lipo使用。

    難轉(zhuǎn)染細胞Thp-1高效率轉(zhuǎn)染條件分享

    二、操作過程:

    1.提前1天接種細胞:細胞匯合度在60-80%左右,再進行轉(zhuǎn)染。

    2. 核酸復(fù)合物制備:將核酸與轉(zhuǎn)染試劑按照比例關(guān)系直接混合,用移液器吹打、混勻,室溫靜止15分鐘。

    3.在細胞培養(yǎng)基中加入核酸復(fù)合物:根據(jù)參考用量在細胞中加入核酸復(fù)合物,并輕輕混勻;細胞培養(yǎng)基里面可以含有血清。

    4.細胞換液:轉(zhuǎn)染24小時后對細胞進行正常換液,懸浮細胞轉(zhuǎn)染過程中不用換液。

    5.分析結(jié)果:質(zhì)粒DNA轉(zhuǎn)染48-72小時后熒光檢測轉(zhuǎn)染效率,48-96小時檢測mRNA或蛋白表達。若進行穩(wěn)定表達細胞株的篩選,則在轉(zhuǎn)染后24-48小時左右加入適量的藥物進行篩選。siRNA轉(zhuǎn)染后9小時熒光檢測轉(zhuǎn)染效率,48-72小時檢測mRNA或蛋白表達。



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